使用美国2B 106-L的论文：使用高压臭氧诱导解离的异构体分辨率的脂质质谱成像
摘要
组织内脂质的质谱成像（MSI）在生物分子发现和组织病理学应用方面具有重要潜力。然而，传统的MSI技术受到了磷脂区域异构体的普遍存在的挑战，这些异构体仅在碳-碳双键的位置和/或脂肪酰基与甘油主链的相对位置（即sn位置）上有所不同。成像实验中无法解析异构体脂质掩盖了潜在的复杂性，导致代谢信息的严重丢失。在此，臭氧诱导解离（OzID）在能够进行基质辅助激光解吸/电离（MALDI）的迁移率启用四极飞行时间（Q-TOF）质谱仪上实现。利用Q-TOF中的离子迁移区，获得了高数量密度的臭氧，导致∼与早期MALDI OzID实施相比，OzID产物离子丰度提高了1000倍。将这种提升转化为成像导致采集率提高了50倍，有助于磷脂异构体分辨率的大面积绘图。绘制大鼠脑切片的异构体分布图揭示了脂质异构体群体的不同分布，其双键和sn位置不同的异构体的区域特异性关联。此外，由臭氧和碰撞诱导的连续离解产生的产物离子在非经典sn-1位置酯化的不饱和脂肪酰基链中实现了双键分配。
臭氧的产生和输送到仪器如前所述。(40)臭氧是使用高浓度臭氧发生器从 UHP 氧气（5.0 级，20 psi @ 0.4 slm；Linde Gas Therapeutics Benelux bv，荷兰埃因霍温）生产的。通过在线监测器 (
106-H; 2B Technologies, Boulder) 测量，臭氧产量优化为 ~275 gm -3 in O 2 。产生的臭氧/氧气混合物通过针阀 (SS-SS8; Swagelok) 连接到质谱仪的离子迁移池气体入口，并调节流量以维持池中 2.9 mbar 的压力。使用未加热的破坏催化剂 (810-0008; IN USA, Inc., Norwood) 将过量的臭氧转化为氧气。监测实验室环境臭氧浓度（
106-L；2B Technologies，Boulder），如果背景臭氧水平升至 75 ppb 以上，则联锁关闭发生器。
结论
这项工作报告了通过在 SYNAPT HDMS G2-S i质谱仪的离子淌度区域的高压环境中执行 OzID，脂质异构体分辨 MSI 的重大进步。将这种方法与 MALDI-MSI 相结合提供了：(i) 反应时间缩短了 1000 倍；(ii) OzID 采集率高达 5 像素 s –1（比之前的实验提高了 50 倍）；(iii) 同时生成 OzID、CID/OzID 和 CID/OzID 2子离子。结合起来，这些进步允许在适合 MALDI-MSI 的反应时间对db-、 sn-和 db+ sn-位置异构体进行 OzID 表征。
探测 db 和sn特征产物离子的能力创造了研究与去饱和延伸和重塑过程相关的区域特异性酶活性的可能性。(10,44)由于脂质既是酶促过程的底物又是产物，因此脂质异构体的空间分布能够深入了解不同组织类型中发生的酶促过程。此外，其中报告的 OzID-MSI 实现提供了增强的灵敏度，可以对丰度较低的甘油磷脂进行异构体分辨成像，特别是来自磷脂类的甘油磷脂。直接观察磷脂类空间分布及其异构体种群（包括脂肪酰基链组成、区域化学和分贝位置）之间的异同，将为不同组织内的脂质修饰和重塑提供特征。因此，异构体分辨 MSI 对于提供跨组织样本和组织样本之间的磷脂种群的整体可视化至关重要。(45)或 DDA(30)) 将允许通过在单个成像采集中分析多个脂质前体离子来更广泛地询问组织脂质代谢。质谱灵敏度或源电离的改进可以允许询问甚至更少丰度的物种或能够以更小的像素尺寸进行采集。总而言之，这项工作代表了异构体分辨 MSI 脂质组学能力的重大进步，包括在全结构水平上对脂质种类进行明确成像。(41)
